페놀은 독성을 지닌 방향족 화합물의 하나로 빛깔이 없는 결정체이며, 물에 녹으면 약한 산성을 띱니다. 냄새가 특수하고 유독하며 쏘는 맛이 납니다. 밴젠고리, 나프탈렌 고리 그 외의 방향족성 고리에 결합하는 수소 원자가 수산기로 치환된 화합물을 총칭하여 페놀이라고 합니다. 페놀은 단백질을 변성시키기 때문에 몸에 묻을 경우 화상을 일으킵니다. 페놀은 쉽게 산회되어 붉은색으로 변성되기 때문에 buffer로 완충시켜 사용해야 하는데, 상온에서 고체화가 되기 때문에 Tris buffer (pH 7.0)에 떨어뜨린 후 갈색 병에 보관해야 합니다. 또한, 샘플의 물을 흡수하기 때문에 Water saturated 시킨 후 사용하여야 합니다.
Phenol을 사용하기 위해서는 증류를 하여야 하는데, Steam distillation 방법을 이용합니다. 물과 섞이지 않는 액체를 정화하는데 주로 사용되는 기술로, 증기압이 1기압일 때 액체가 끓는데, 액체의 총 기압과, 혼합물의 총 기압의 합이 1기압이 넘으면 bubble을 형성하고, 혼합물이 흐르면서 물은 따로 분리됩니다. 액체는 비등점 이하의 온도에서 효과적으로 증류되므로, 온도에 따라 불안정해지는 액체를 증류하는데 유용합니다.
Ball- mil type homogenizer는 생체시료를 파쇄하여 생화학적 분석을 하기 위한 전처리에 이용하는 장치입니다. ball-mill type homogenizer는 비즈나 경구를 넣어 좀 더 미세하게 파쇄할 수 있는 장치입니다. 식물이나 곰팡이 등 세포벽이 있는 세포시료 파쇄에 유효합니다.
실험 재료로는 Ball-mill type homogenizer, cell, TSE buffer, Phenol, Chloroform, Ion bids, 냉동원심분리기, Ethanol을 준비합니다. 베어링에 cell, buffer, phenol, chloroform, ion bids를 조성에 맞게 넣어줍니다. 5분간 mix (총 3회) 해줍니다. 중간에 열을 식히기 위해 5분씩 휴식을 취해주어야 합니다.
그 다음 냉동원심분리기에 14K, 15min 돌립니다. 용액층을 분리하여 2개의 tube에 모읍니다. 1 tube는 상등액 6ml, 2 tube는 상등액에 2배의 ethanol을 넣는다. 마지막으로 실험한 용액들을 냉동보관합니다.
ball-mill homogenizer을 작동시킬 때에는 열이 발생하므로 중간에 5min 정도 휴식시간을 주어야 하며, 뚜껑을 너무 꽉 닫으면 열에 의한 팽창에 의해, 뚜껑이 열리지 않으므로 살짝 닫아야 합니다. 이 실험에서 농도가 높은 ethanol은 수분을 흡수하여 물에 녹은 DNA가 침전하도록 합니다.