Gradient Fraction collector는 Gradient를 분수 및 감지하는 데 필요한 기계입니다. gradient가 고밀도 chase 용액에 의해 튜브의 바닥에서 위로 이동하며 정확하게 측정 된 분수로 수집 될 때 기기 시스템은 연속 흡광도 profile을 생성합니다. Fraction collector를 사용하여 분리된 부분을 수집할 수 있으며, 프로그램 가능한 시스템과 동일한 튜브 홀더와 UV 검출기를 사용하며, 유사하게 밀도가 높은 chase 용액에 의해 튜브의 바닥에서 상단으로 기울기가 변함에 따라 연속 흡광도 프로파일을 생성합니다.
Fraction collector 안의 주사기 모양 기구 안에는 안정화시키는 무거운 액체가 있는데, 이 액체가 detector를 통과하며 가는 관을 지나가고 핵산은 UV를 흡수합니다. 바이러스가 없을 경우 virus graph가 직선형태로 있다가 있을 경우 peak가 형성됩니다. 먼저 top이 오른 후 천천히 내려오다가 base line까지 떨어지는데, 중간에 virus peak가 형성되면 그 부분의 sucrose를 모으면 됩니다. 보통 두 개의 peak가 형성되는데, 첫 번째 peak는 virus particle이 존재하는 empty virus 부분이고, 두 번째 peak가 main peak 입니다. 액체가 fraction collector를 지나 나오는 시간이 1분 10초이므로, peak가 뜬 후 1분 10초 뒤에 나오는 액체를 모으면 됩니다.
먼저 Sucrose density tube에 1.0-2.0 O.D의 cell을 꼭대기에 넣습니다. SW-55 rotor를 이용하여 40K, 2hrs 동안 centrifugation을 합니다. 이 후 Gradient fraction collector를 이용하여 virus peak를 관찰합니다. peak가 형성도니 부분의 sucrose sample을 모아 상온보관합니다.
Sucrose density를 한 tube를 원심분리하면 확연히 band가 형성되는데, 이 band 부분을 fraction collector를 이용하여 받으면 됩니다. 액체가 기계를 통과하는데 걸리는 시간이 1분 10초 이므로 바이러스 피크가 뜨고나서 1분 10초 후에 액체를 받으면 됩니다. 앞의 피크는 바이러스 조각들이 있는 empty virus이고, 뒤의 본 피크 큰 것이 바이러스 메인피크입니다. tube 3개를 fraction 하여 모두 모았습니다. 피크의 윗 부분이 뭉툭하게 잘린 것은 paper의 크기가 작아 밀도가 높은 바이러스의 피크를 표현하지 못해서입니다.